应用PCR-反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐链霉素基因型

作     者：梁建琴 吴雪琼 曹立雪 张俊仙 李洪敏 

作者机构：解放军第三零九医院结核病研究中心北京100091 

基　　金：军队医学杰出中青年人才科研基金项目 (0 1JO2 0 ) 

出 版 物：《中国医师杂志》 (Journal of Chinese Physician)

年 卷 期：2004年第6卷第9期

页      码：1170-1172页

摘      要：目的　应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 (SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和rrs的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR -单链构象多态性 (PCR -SSCP)和PCR -直接测序 (PCR -DS)结果比较。结果　 5 3株结核分枝杆菌临床分离株中 ,三种检测方法符合率为 10 0 %。 9株敏感株rpsL和rrs基因的SSCP图谱、膜杂交结果与标准株完全相同 ;44株耐SM菌株中 ,3 3株存在rpsL基因 43位密码子AAG→AGG突变 ,6株有rrs基因 5 13位A→C突变 ,1株有rrs基因 5 13位A→T突变 ,突变检出率为 90 .9%,40株耐SM菌株和 9株敏感株可用膜杂交方法检测出来 ,与传统药敏试验方法检测符合率为 49/5 3。结论　应用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐SM基因型灵敏度高、特异性好、简便、快速 。

主 题 词：PCR-反向斑点杂交 快速检测 结核分枝杆菌 链霉素 基因型 耐药性 基因变异 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2004.09.007

馆 藏 号：203131327...