重组人干细胞因子-血小板生成素融合蛋白的表达及活性初步研究

作     者：刘楠 奚永志 郭斯启 孙玉英 袁志宏 崔建武 习彩霞 梁飞 孔繁华 

作者机构：军事医学科学院附属医院国家生物医学分析中心免疫学研究室北京100039 

出 版 物：《中华血液学杂志》 (Chinese Journal of Hematology)

年 卷 期：2005年第26卷第1期

页      码：19-22页

摘      要：目的研究重组人干细胞因子血小板生成素(SCFTPO)融合蛋白表达的最佳条件及其生物学活性。方法设计引物,利用RTPCR从胎肝细胞中扩增到SCF和TPO氨基端功能区片段,采用基因融合新策略将其融合成SCFTPO融合基因,克隆到pGEMT载体中,构建pET32a/SCFTPO融合基因原核表达载体,在宿主菌***21(DE3)plysS中经异丙基βD硫代半乳糖(IPTG)诱导其高表达SCFTPO,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot检测。目的蛋白经包涵体变性,金属螯合层析纯化,透析复性,用细胞因子依赖细胞系MO7e进行细胞增殖实验。结果获得SCFTPO融合基因的高表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。Westernblot法鉴定表达正确,MTT法证明该融合蛋白具有细胞增殖活性,浓度为100ng/ml时刺激活性更强。结论表达并复性后的重组人SCFTPO融合蛋白具有刺激MO7e细胞生长活性。

主 题 词：高表达 SCF 血小板生成素 融合蛋白 TPO 融合基因 活性 重组人干细胞因子 复性 IPTG 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2005.01.007

馆 藏 号：203131426...