弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定

作     者：杨雯 田春林 朱穗京 刘晓泉 

作者机构：广西医科大学寄生虫学教研室南宁530021 

基　　金：广西科学研究与技术开发计划项目(桂科合0443004-36) 

出 版 物：《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)

年 卷 期：2010年第27卷第2期

页      码：205-208页

摘      要：目的:构建弓形虫SAG1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白SAG1,分离纯化并检测其免疫反应性。方法:设计一对特异引物,体外扩增SAG1目的基因(双酶切纯化后)定向克隆至质粒pET29a(+)中,转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,采用PCR、双酶切和测序等方法鉴定,并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况,经镍离子柱纯化重组蛋白后,用蛋白质印迹(Western blotting)分析与小鼠弓形虫阳性血清的免疫反应性。结果:重组质粒经PCR、双酶切反应和测序鉴定,产物的大小与结构均与预期值相符,经IPTG诱导后,稳定表达相对分子量(Mr)为28950的蛋白,纯化后的重组蛋白经Western blotting分析显示,与小鼠弓形虫感染血清有特异性反应条带。结论:成功构建重组表达质粒pET29a(+)-SAG1,使弓形虫表面抗原SAG1在体外获得表达,分离纯化的SAG1重组蛋白有免疫反应性。

主 题 词：弓形虫 SAG1基因 克隆表达 纯化 免疫反应性 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-930X.2010.02.013

馆 藏 号：203131765...