牛源大肠杆菌F41菌毛蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备

作     者：倪宏波 郎秀艳 邵光喜 周玉龙 焉秋龙 刘银冰 宫大庆 王春仁 

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 

基　　金：黑龙江省高校科技创新团队建设计划(2010td05) 黑龙江八一农垦大学博士后基金(农业部农产品加工质量监督检验测试中心) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2013年第26卷第1期

页      码：48-50,55页

摘      要：目的原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体。方法以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性。结果重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确;F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,纯化的重组蛋白纯度可达92%;制备的抗血清效价达1∶2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性。结论已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础。

主 题 词：产毒素性大肠杆菌 F41菌毛 原核细胞 基因表达 多克隆抗体 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cjb.2013.01.53.nihb.003

馆 藏 号：203131892...