香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

作     者：谭翰清 谭海芳 林凤 丁丽娜 程洁萍 朱颖梅 苏乐斌 陈华 

作者机构：肇庆市疾病预防控制中心广东肇庆526060 

基　　金：广东省肇庆市科技创新计划项目(2009E1826) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2013年第13卷第1期

页      码：39-42页

摘      要：目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝/反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0.183%。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌,16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99.5%以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。

主 题 词：香港海鸥形菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

馆 藏 号：203131894...