抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达

作     者：刘喜富 萧飒 顾征 王勇 陈艾 林晴 张卫国 黄华梁 孙健 陈润生 沈倍奋 陈兴 

作者机构：中国科学院遗传研究所北京100101 中国科学院生物物理研究所北京100101 军事医学科学院基础研究所北京100850 

基　　金：国家"八六三"计划 国家自然科学基金资助项目 

出 版 物：《中国科学（C辑）》 (Science in China(Series C))

年 卷 期：1996年第26卷第5期

页      码：428-435页

摘      要：设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.

主 题 词：CD3 单链抗体 改形抗体 分子设计 基因表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

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馆 藏 号：203133180...