HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定

作     者：杨怀宁 徐卉 浦昀 于湘晖 张煜 赵大力 孙志伟 YANG Huai-ning;XU Hui;PU Yun;YU Xiang-hui;ZHANG Yu;ZHAO Da-li;SUN Zhi-wei

作者机构：吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室吉林长春130021 吉林大学第一医院电诊科吉林长春130021 吉林大学生命科学学院疫苗研究中心吉林长春130012 吉林出入境检验检疫局吉林长春130062 

基　　金：国家质检总局科研基金资助课题(2007IK202) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2008年第34卷第2期

页      码：221-225页

摘      要：目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44000的蛋白带,与设计相对分子质量相符。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应。结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性。

主 题 词：人免疫缺陷病毒 合成基因 基因表达 活性鉴定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 1010[医学-医学技术类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-587X.2008.02.013

馆 藏 号：203133215...