MMP-9基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：金哲秀 王育珊 李南 JIN Zhe-xiu;WANG Yu-shan;LI Nan

作者机构：吉林大学附属第二医院急救医学科吉林长春130041 黑龙江省医院心内科黑龙江哈尔滨150036 

基　　金：黑龙江省留学归国人员科学技术专项资金(LC07C15) 哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(2008RFLXS016) 

出 版 物：《哈尔滨医科大学学报》 (Journal of Harbin Medical University)

年 卷 期：2010年第44卷第1期

页      码：19-21,25页

摘      要：目的构建小鼠基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体。方法针对小鼠MMP-9基因序列,利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列,并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,用插入鉴定引物进行PCR鉴定阳性克隆并测序,应用Western blot在293T细胞中鉴定MMP-9表达的下调作用。结果PCR鉴定和DNA测序结果显示合成的含MMP-9 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确;构建的MMP-9RNAi慢病毒载体能够抑制MMP-9的表达。结论应用基因工程技术,成功构建了小鼠MMP-9基因RNAi慢病毒载体,为应用于在体基因治疗创造了条件。

主 题 词：基质金属蛋白酶-9 RNA干扰 慢病毒载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-1905.2010.01.005

馆 藏 号：203133300...