人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探

作     者：张乐之 张彦 李德彬 叶丙雨 肖丽霞 赵玉军 赵志虎 ZHANG Le-zhi;ZHANG Yan;LI De-bin;YE Bing-yu;XIAO Li-xia;ZHAO Yu-jun;ZHAO Zhi-hu

作者机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2012年第36卷第1期

页      码：40-43页

摘      要：目的构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能。方法设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列。将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139。将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平。结果酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显。结论成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础。

主 题 词：miR-139 真核表达载体 qRT-PCR ZR75-1 癌基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2012.01.011

馆 藏 号：203133394...