下调脂肪酰胺水解酶重组慢病毒载体的构建和鉴定

作     者：丁得方 李荣春 周伶 Ding Defang;Li Rongchun;Zhou Ling

作者机构：华中科技大学同济医学院附属普爱医院疼痛科武汉430010 

基　　金：湖北省卫生厅科研项目(JX6835) 武汉市卫计委科研项目(WX13815) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2014年第31卷第4期

页      码：838-839页

摘      要：目的构建携带脂肪酰胺水解酶（FAAH）基因的小分子干扰RNA表达载体。方法设计合成短发卡RNA（shRNA）FAAH对应的两条互补的寡核苷酸链，mU6-MCS-Ubi-EGFP质粒经HpaI和XhoI进行双酶切与退火后的寡核苷酸连接，目的质粒转化感受态细胞，对克隆的菌落行聚合酶链反应鉴定，再对聚合酶链反应（PCR）鉴定阳性的克隆进行测序，测序正确的重组质粒转染293细胞，同源重组产生Lentivirus-FAAH-shRNA并测定病毒滴度。结果经测序证实mU6-FAAshRNA-Ubi-EGFP表达载体构建正确，并且病毒滴度为7．0×10^8TU/ml。结论实验成果构建mU6-FAAH-shRNA-Ubi-EGFP表达载体。

主 题 词：脂肪酰胺水解酶 重组质粒 RNA干扰 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.04.054

馆 藏 号：203133485...