微小隐孢子虫LDH基因的克隆与序列分析

作     者：郭志云 杨光 荆春霞 付芹芹 孙小会 王穗湘 李月琴 余新炳 周天鸿 GUO Zhi-yun;YANG Guang;JING Chun-xia;FU Qin-qin;SUN Xiao-hui;WANG Sui-xiang;LI Yue-qin;YU Xin-bing;ZHOU Tian-hong

作者机构：暨南大学医学院广州510632 暨南大学生命科学技术学院广州510632 中山大学基础医学院广州510089 

基　　金：国家自然科学基金(30901249) 广东省自然科学基金(10151063201000036) 广东省医学科研基金(B2007097)联合资助 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2010年第26卷第12期

页      码：1129-1133页

摘      要：目的克隆微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,Cp)南京株(NJ)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,测序并分析微小隐孢子虫NJ株CpLDH与其他隐孢子虫分离株LDH基因序列的差异。方法根据微小隐孢子虫已知LDH基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增LDH基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,阳性克隆的重组质粒经PCR及双酶切鉴定后,用双脱氧链终止法对重组质粒中的插入序列进行测序,应用生物信息学方法分析CpLDH基因序列和其他物种LDH序列的同源性。结果巢式PCR扩增得到特异的CpLDH基因序列,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-CpLDH重组质粒。测序表明,NJ株微小隐孢子虫LDH基因全长966bp,编码322个氨基酸,该基因序列已登录GenBank,登录号为HM001298。序列分析表明,我国微小隐孢子虫NJ株与国外分离的Iowa II株LDH基因编码的氨基酸序列具有98%的同源性。结论成功克隆了微小隐孢子虫NJ株LDH基因;序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株在LDH酶关键结构位点存在突变。

主 题 词：微小隐孢子虫 乳酸脱氢酶 巢式PCR 生物信息学 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2010.12.012

馆 藏 号：203134250...