变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的表达、纯化与鉴定

作     者：武文琦 丛旭珍 殷爱红 胡家 翟方丽 李慎涛 WU Wen-qi;GONG Xu-zhen;YIN Ai-hong;HU Jia;ZHAI Fang-li;LI Shen-tao

作者机构：首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学和免疫学系北京100069 首都医科大学医学实验与测试中心北京100069 青岛阜外心血管病医院检验科青岛266034 

出 版 物：《首都医科大学学报》 (Journal of Capital Medical University)

年 卷 期：2012年第33卷第2期

页      码：227-232页

摘      要：目的在大肠杆菌中高效表达变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A(ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA),并对表达产物进行纯化和鉴定。方法根据GenBank中变异链球菌UA159株基因组rpiA的DNA编码序列,设计PCR引物,扩增变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的DNA编码序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;对培养温度、IPTG用量、诱导时间等条件进行了优化;用亲和层析、离子交换层析纯化目标蛋白;用SDS-PAGE和质谱对目标蛋白进行鉴定。结果变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白。经过纯化,得到纯度高达95%的变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究变异链球菌属核糖-5-磷酸异构酶蛋白的生物学活性及功能奠定了基础。

主 题 词：变异链球菌 核糖-5-磷酸异构酶A 融合蛋白 原核表达 蛋白纯化 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-7795.2012.02.019

馆 藏 号：203134379...