人整合素β_3亚基毕赤酵母表达载体的构建及鉴定

作     者：牛舜 张芳琳 李璞媛 胡刚 刘艳丽 吴兴安 张蕾 白文涛 NIU Shun;ZHANG Fang-lin;LI Pu-yuan;HU Gang;LIU Yan-li;WU Xing-an;ZHANG Lei;BAI Wen-tao

作者机构：第四军医大学微生物学教研室西安710032 

基　　金：国家自然科学基金(30170018 30470090) 军队"十一五"基金课题面上项目(06M255) 校级学员课外课题资助 

出 版 物：《科学技术与工程》 (Science Technology and Engineering)

年 卷 期：2007年第7卷第15期

页      码：3660-3664页

摘      要：目前研究表明整合素β3亚基是多种病毒的细胞表面受体,然而整合素β3亚基与不同病毒受体结合蛋白VAP相互作用的分子机制还不完全清楚。为此,设计引物,采用RT-PCR方法扩增人β3亚基包膜外区约2.1kb片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。双酶切鉴定挑取阳性克隆pPIC3.5K-β3,测序证实目的基因序列正确。将pPIC3.5K-β3转化毕赤酵母工程菌GS115,在浓度为3.0mg/mL的G418选择培养基上,筛选出含有多拷贝目的基因的阳性菌株,PCR可扩增出约2.1kb的目的条带。阳性菌株经1%甲醇诱导表达,Western-blot可在酵母菌体中检测到约80kDa的目的蛋白条带。上述结果表明,成功构建了人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体,筛选获得多拷贝阳性菌株并成功表达,为进一步研究人整合素β3在病毒感染中的作用及其单克隆抗体的制备奠定基础。

主 题 词：整合素 胞膜外区 毕赤表达系统 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-1815.2007.15.006

馆 藏 号：203134728...