禽致病性大肠杆菌IMT5155株毒力相关基因片段E9的表达及生物学特性分析

作     者：马新蕾 王少辉 刘永杰 戴建君 MA Xin-lei;WANG Shao-hui;LIU Yong-jie;DAI Jian-jun

作者机构：南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫国家重点开放试验室江苏南京210095 河南省康星药业有限公司河南中牟451464 

基　　金：中德农业科技合作项目(农科(31)函第43号) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第42卷第2期

页      码：20-24页

摘      要：根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在ORF的部分序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32.2 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性。对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验。结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用。

主 题 词：禽致病性大肠杆菌 毒力相关基因 E9 融合表达 生物学功能 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203134838...