胰腺癌PANC1细胞microRNA-217靶基因ANLN的鉴定

作     者：江寅 侯宝华 简志祥 王慧玲 崔鹏 区金锐 JIANG Yin;HOU Bao-hua;JIAN Zhi-xiang;WANG Hui-ling;CUI Peng;OU Jin-rui

作者机构：广东省人民医院普通外科广东省医学科学院广东广州510080 

基　　金：广东省自然科学基金(2011010005036) 卫生公益性行业科研专项经费项目(201202007) 

出 版 物：《中华胰腺病杂志》 (Chinese Journal of Pancreatology)

年 卷 期：2013年第13卷第3期

页      码：175-178页

摘      要：目的通过实验验证ANLN为microRNA-217（miR-217）的靶基因。方法使用生物学软件预测miR-217调控的靶基因可能为ANLN。设计并合成mR-217结合的ANLN及突变型ANLN（mutANLN）序列，将其PCR扩增的片段插入表达质粒psiCHECK-2，构建重组质粒***及psiCHECK-2-mutANLN。采用脂质体法将2个重组质粒单独或分别与miR-217、miR．217inhibitor及与人同源性远的miRNA序列（NC）、NCinhibitor共转染胰腺癌PANCl细胞，采用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性，采用蛋白质印迹法检测ANLN蛋白的表达。结果转染psiCHECK-2-ANLN、psiCHECK-2-ANLN＋miR-217、psiCHECK-2-ANLN＋miR-217inhibitor、psiCHECK-2-ANLN＋NC、psiCHECK-2-ANLN＋NCinhibitor各组问的荧光素酶活性分别为2．221±0．188、0．7694-0．061、3．764±0．371、2．265±0．201、2．242±0．018，差异有统计学意义（F=77．405，P〈0．01），但psiCHECK-2-ANLN组、psiCHECK-2-ANLN＋NC组及psiCHECK-2-ANLN＋NCinhibitor组两两比较差异无统计学意义，而psiCHECK-2-ANLN＋miR-217组的荧光素酶活性较这3组明显下降，psiCHECK-2-ANLN＋miR-217inhibitor组活性较其他4组明显升高（P值均〈0．01）。转染psiCHECK-2-mutANLN各组间荧光素酶活性差异无统计学意义（P=0．053）。***＋miR-217共转染组PANC1细胞的ANLN蛋白表达水平较单纯转染psiCHECK-2-ANLN组细胞的ANLN蛋白表达明显下调。结论在胰腺癌中，ANLN可能是miR-217的直接靶基因。

主 题 词：胰腺肿瘤 微RNAs miR-217 基因 ANLN 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2013.03.008

馆 藏 号：203134986...