Daxx-C626-740原核细胞表达载体的构建与诱导表达

作     者：李耀林 周艺 何爱桃 唐双阳 王蓉 万艳平 LI Yao-lin;ZHOU Yi;HE Ai-tao;TANG Shuang-yang;WANG Rong;WAN Yan-ping

作者机构：南华大学病原生物学研究所湖南衡阳421001 南华大学公共卫生学院湖南衡阳421001 南华大学护理学院湖南衡阳421001 

基　　金：湖南省教育厅重点项目(11A102) 湖南省教育厅一般项目(12C0337) 衡阳市科技局项目(2011KJ2) 

出 版 物：《中国医药指南》 (Guide of China Medicine)

年 卷 期：2013年第11卷第35期

页      码：1-3页

摘      要：目的为了研制Daxx-C抗体并观察其在宫颈癌细胞中的应用效果,构建原核表达载体pET28a/DM626-740,将其在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物,鉴定其抗原性。方法用PRIMER5.0软件设计Daxx-C基因片段(氨基酸626-740)特异性引物,引入BamHI和SalI酶切位点,PCR扩增目的基因。将PCR产物连入载体pMD18-T,构建pMD18-T/DM626-740;然后,将BamHI和SalI酶切产物连入载体pET28a,经酶切鉴定及DNA序列分析后,构建原核表达载体pET28a/DM626-740。将其转化*** BL21,IPTG诱导表达,利用Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物,Western-blot检测表达物与纯产物。结果双酶切和DNA测序结果显示,PCR正确扩增了Daxx-C基因片段并成功连入载体pET28a,构建了原核表达载体pET28a/DM626-740;该质粒在***中诱导表达分子量约19kDa目的蛋白,且该蛋白能被抗Daxx抗体检出。结论构建的原核表达载体pET28a/DM626-740能在***中表达目的的蛋白6His-DM626-740,并具有良好的抗原性。

主 题 词：Daxx 表达 纯化 抗原性 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.15912/j.cnki.gocm.2013.35.369

馆 藏 号：203135092...