幽门螺旋杆菌尿素酶多表位疫苗CTB-UE的生物信息学分析及其表达

作     者：刘昆梅 秦玉红 奚涛 郭乐 LIU Kun-mei;QIN Yu-hong;XI Tao;GUO Le

作者机构：宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院临床病原微生物重点实验室宁夏银川750021 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 

基　　金：宁夏自然科学基金(NZ13274) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2015年第28卷第12期

页      码：1238-1244页

摘      要：目的通过生物信息学软件评价幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶多表位疫苗CTB-UE的抗原结构,并在***中表达、纯化融合蛋白CTB-UE。方法应用生物信息学软件DNAstar、Geno3D、MOE分析Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE的二级结构和三级结构;将人工合成的尿素酶多表位肽基因UE插入含CTB基因的重组质粒p ETC中,构建重组表达质粒p ETCUE,转化*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化重组蛋白CTB-UE,并进行Western blot分析。结果生物信息学软件分析显示,Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构;重组表达质粒p ETCUE经双酶切和测序鉴定证实,融合基因CTB-UE与设计序列完全一致;表达的融合蛋白CTB-UE相对分子质量约为33 000,主要以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白的22.3%;纯化的融合蛋白CTB-UE纯度达95.6%,可与兔抗Hp多克隆抗体发生特异性结合。结论设计的Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构,能在***中高效表达,纯化后纯度较高,且具有较强的反应原性,为进一步研究针对尿素酶A、B双亚基的Hp多表位疫苗奠定了基础。

主 题 词：幽门螺旋杆菌 尿素酶 融合蛋白 多表位疫苗 生物信息学 表达 纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 09[农学] 100103[100103] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.001157

馆 藏 号：203135102...