DNMT3a基因shRNA质粒表达载体的构建及其沉默作用

作     者：吴艳凤 李德涛 郑倩 李雪 薛成军 陈辉 

作者机构：重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 

基　　金：重庆市自然科学基金(cstc2012jj A10105) 重庆市卫生局医学科研计划项目(No.2012-2-016) 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2015年第35卷第6期

页      码：1612-1615页

摘      要：目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3a-shRNA、p Genesil-1-HK-shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中,通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定,应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌A549细胞(A549-DDP),利用RT-PCR技术检测转染重组质粒24、48、72 h后DNMT3a的沉默效率。结果测序结果与合成序列一致,重组质粒不能够被PstⅠ切开,转染p Genesil-1-DNMT3a-shRNA能够明显抑制DNMT3a的表达,抑制率分别达到25.5%,56.2%,63.4%,且呈明显时间依赖性,而p Genesil-1-HKshRNA无明显抑制作用。结论成功构建了DNMT3a基因shRNA及HK质粒真核表达载体,为进一步实验研究奠定了基础。

主 题 词：DNMT3a RNA干扰 小发卡RNA 重组质粒 A549-DDP细胞株 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.06.085

馆 藏 号：203135167...