四环素抗性表型筛选外源基因高效表达克隆

作     者：李玉富 孙声桃 李继昌 李福胜 张智清 Li Yufu;Sun Shengtao;LI Jichang;Li Fusheng;ZHANG Zhiqing

作者机构：河南省肿瘤医院生物治疗中心郑州450008 河南省眼科研究所郑州450003 河南医科大学第一附属院内科郑州450052 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 

基　　金：国家"8 63"高科技计划资助项目! 83 10 2 11 0 9 

出 版 物：《河南医科大学学报》 (Journal of Henan Medical University)

年 卷 期：2001年第36卷第3期

页      码：267-271页

摘      要：目的 :应用四环素抗性表型从外源基因的cDNA文库中筛选高效表达克隆。方法 :将四环素抗性基因(TetR)克隆到载体pBV2 2 0 中构建筛选载体pBV2 2 3 ;根据氨基酸密码子的简并性 ,在保持原有氨基酸序列不变的情况下 ,人工合成外源基因的cDNA 5′端简并引物库 ,以hGM CSF基因为例进行筛选。把hGM CSFcDNA简并文库克隆到pBV2 2 3 中的TetR 上游位置 ,构建pBV2 2 3 /hGM CSF克隆文库 ,导入大肠杆菌DH5α中 ,构建转基因的细菌文库 ,在不同质量浓度 (2 0mg/L ,40mg/L ,5 0mg/L ,6 0mg/L)的四环素培养基中培养。结果 :从高浓度四环素培养基中获得高效表达的pBV2 2 3 /hGM CSF克隆 ,测序结果显示该克隆的hGM CSFcDNA 5′端序列与天然序列比较有 7个碱基发生突变 ,且符合实验设计的要求。通过基因重组 ,构建成最终的高效表达克隆pBV2 2 0 /hGM CSF ,其表达hGM CSF的量占细菌总量的 18% ,较原表达水平提高 80 %。结论 :可通过四环素抗性筛选系统筛选外源基因的高效表达克隆。

主 题 词：四环素抗性GM-CSF 克隆 筛选 cDNA文库 外源基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6825.2001.03.012

馆 藏 号：203135577...