HPV16E6基因原核表达载体的构建及表达

作     者：彭方毅 姜海蓉 彭方亮 赵卫兵 林治华 陈远翔 陈胜珍 

作者机构：重庆理工大学化学与生物工程学院重庆400050 重庆市第四人民医院妇产科重庆400014 重庆市第四人民医院麻醉科重庆400014 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30571714 60873103) 国家自然科学基金重点项目资助(30830090) 重庆市科委自然科学基金资助项目(2008BB5331 2009BB7231) 重庆市教委自然科学基金资助项目(KJ090614) 重庆理工大学重点学科微生物与生化药学资助 

出 版 物：《生物医学工程学杂志》 (Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2010年第27卷第4期

页      码：847-850页

摘      要：构建HPV16E6基因原核表达载体并进行表达。根据GenBank中的人乳头瘤病毒(HPV)序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出321 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16E6已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16E6质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果在大肠杆菌中获得HPV16E6基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为38 kD;以IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h后融合蛋白产量最高。表达的蛋白能与抗HPV16E6抗体发生特异性反应。HPV16E6基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16E6疫苗的研制奠定了基础。

主 题 词：HPV16E6 原核表达 GST融合蛋白 疫苗 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

馆 藏 号：203135686...