牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析

作     者：何延华 景志忠 陈国华 房永祥 蒙学莲 李小庆 段风云 王生富 HE Yan-hua;JING Zhi-zhong;CHEN Guo-hua;FANG Yong-xiang;MENG Xue-lian;LI Xiao-qing;DUAN Feng-yun;WANG Sheng-fu

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 

基　　金：国家863项目(2006AA10A203) 甘肃自然基金(325061-A25-081) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2009年第31卷第8期

页      码：631-636页

摘      要：为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200bp～1000bp之间。随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率。结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量。本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因。

主 题 词：外周血单个核细胞(PBMC) 诱导刺激 抑制消减杂交 cDNA文库 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

馆 藏 号：203135777...