人羊膜间充质干细胞培养上清液对人成纤维细胞生物学功能的影响

作     者：吴骐而 吕璐 辛海明 罗亮 童亚林 莫永亮 岳毅刚 Wu Qi'er;Lyu Lu;Xin Haiming;Luo Liang;Tong Yalin;Mo Yongliang;Yue Yigang

作者机构：桂林医学院附属医院烧伤整形美容科541001 解放军第一八一医院烧伤整形科 

基　　金：国家自然科学基金(81301634) 全军医学科技“十二五”科研项目面上项目(CWS11J277) 广西自然科学基金(2013GXNSFBA019203、2015GXNSFAA139113) 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2016年第32卷第6期

页      码：370-375页

摘      要：目的探讨人羊膜间充质干细胞（hAMSC）培养上清液（hAMSC－CS）对人Fb生物学功能的影响。方法（1）取废弃胎盘新鲜羊膜组织，分离hAMSC，并进行传代培养。倒置相差显微镜下观察培养3 d及第3代hAMSC形态。（2）取2批次第3代hAMSC，免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达，流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达。（3）收集培养72 h的第3代hAMSC－CS，ELISA法检测其中胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）、血管内皮生长因子（VEGF）、EGF、bFGF的含量。（4）取包皮环切术后废弃包皮，分离人Fb，并进行传代培养。采用第3代人Fb进行以下实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为空白对照组及10%、30%、50%、70%hAMSC－CS组，每组48孔。空白对照组用含体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养，后4组分别用含相应体积分数hAMSC－CS和体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养。培养12、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性。选取使人Fb增殖活性最高的相应体积分数hAMSC－CS用于以下实验。（5）另取人Fb，分为空白对照组及50%hAMSC－CS组，同（4）处理，每组4孔。分别于划痕后0（即刻）、12、24、48、72 h，于倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。（6）另取人Fb，同（5）分组处理，每组3瓶，流式细胞仪检测细胞凋亡率。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、t检验。结果（1）培养3 d，多数hAMSC形态较大，呈纺锤形多突起的Fb样或扁平多角形。第3代hAMSC呈梭形或纺锤形，波形蛋白表达呈强阳性，细胞表面标志物CD90、CD73、CD105表达阳性，CD45表达阴性。（2）hAMSC－CS中IGF－Ⅰ、VEGF、EGF、bFGF的含量分别为（11.7±1.0）、（316±68）、（6.1±0.4）、（1.49±0.05）pg/mL。（3）培养12～72 h，各hAMSC－CS组人Fb增殖活性明显高于空白对照组（P值均小于0.01），50%hAMSC－CS组人Fb增殖活性最高。（4）划痕后0 h，2组人Fb划痕宽度几乎相同。划痕后12～72 h，50%hAMSC－CS组人Fb迁移距离明显长于空白对照组（P值均小于0.01）。（5）空白对照组人Fb凋亡率为（16.2±2.4）%，明显高于50%hAMSC－CS组的（7.4±3.6）%（t＝6.710，P〈0.01）。结论hAMSC－CS对人Fb的增殖和迁移具有促进作用，对人Fb的凋亡有抑制作用。

主 题 词：间质干细胞 成纤维细胞 细胞增殖 细胞运动 细胞凋亡 人羊膜间充质 干细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2016.06.013

馆 藏 号：203136223...