汉坦病毒部分S基因在毕赤酵母中的分泌表达

作     者：朱函坪 姚苹苹 邓小昭 徐芳 谢荣辉 朱智勇 张云 ZHU Han-ping;YAO Ping-ping;DENG Xiao-zhao;XU Fang;XIE Rong-hui;ZHU Zhi-yong;ZHANG Yun

作者机构：浙江省疾病预防控制中心浙江省肾综合征出血热疫苗重点研究实验室浙江杭州310051 南京军区军事医学研究所 

基　　金：国家“863”高技术研发计划(编号:2007AA02ZA465) 国家自然科学基金项目(30771861) 浙江省自然科学基金项目(Y205749) 浙江省医药卫生重点科技项目(2005ZD002) 南京军区医药卫生项目(08MB151) 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2009年第23卷第6期

页      码：434-436页

摘      要：目的构建并表达汉坦病毒（HV）Z10株（HV-Z10）S基因蛋白编码区前300bp核苷酸序列，研究该基因在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达及其产物的生物活性。方法根据HV-Z10 S基因前300bp（S300）的核苷酸序列，按照编码氨基酸的密码子转换成酵母偏爱的形式，设计合成8条引物，通过连续PCR，获得人工合成Z10株S基因前300bp的基因序列SP300，经测序，SP300与S300的核苷酸相似性为76.2％，但编码的氨基酸序列完全一致。将SP300克隆到酵母穿梭载体pPICZaA，构建含α-factor分沁信号肽的重组表达载体pPICZaA-SP300。将pPICZaA-SP300、pPICZaA-S300化学法转化酵母GS115菌株，筛选重组转化子。结果重组了SP300与S300的酵母转化子经甲醇诱导，表达出重组蛋白rNP300及rN300，SDS-PAGE显示相对分子质量为12×10^3左右。经ELISA检测及Western Blot分析，表达产物能与抗汉坦病毒抗体起免疫反应。结论SP300和S300基因在毕赤酵母中获得分泌表达，使用酵母偏爱密码子的SP300基因在毕赤酵母中的表达量与S300的表达量基本一致，表达量在诱导24h后最高。

主 题 词：汉坦病毒属 基因 基因表达 毕赤酵母 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2009.06.011

馆 藏 号：203136366...