用COLD—PCR方法提高BCR—ABL1激酶区耐药突变检测灵敏度

作     者：李庆 刘红星 孙慧 王倩 张之芬 武焕玲 李元堂 陈永金 田文君 

作者机构：山东省淄博市第一医院检验科山东省255200 北京市道培医院检验中心 山东大学附属省立医院检验科 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(81101484) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2013年第36卷第3期

页      码：246-251页

摘      要：目的探讨用低变性温度共扩增PCR（COLD-PCR）方法提高BCR—ABL1融合基因激酶区耐药突变检测灵敏度的可行性。方法本研究为实验诊断研究。设计常规巢式PCR（CN—PCR）和COLD—PCR方案扩增BCR—ABL1激酶区全长，扩增产物纯化后用Sanger测序法检测激酶区突变（KDM）。采集32例经伊马替尼（IM）治疗并出现耐药的慢性粒细胞性白血病（CML）患者和20例初诊CML患者外周血或骨髓标本，用上述2种方案检测标本中的KDM。用PCR扩增和基因克隆方法鉴定患者标本中KDM所占比例。制备含不同KDM比例的标准品，对比分析2种方法的检测灵敏度。结果32例IM耐药患者中，共检出15种KDM。其中用CN—PCR方法检出23例（71．9％）KDM阳性，用COLD—PCR检出28例（87．5％）KDM阳性。在20例初诊CML患者中，用CN—PCR未检出KDM，用COLD—PCR方法检出1例有P．E459K突变，突变型基因比例为3．5％。对于16种不同类型的KDM，COLD—PCR方法可提高检测灵敏度4～12倍。结论用COLD—PCR方法可有效提高BCR—ABL1激酶区耐药突变的检测灵敏度，有助于早期发现耐药突变。（中华检验医学杂志，2013，36：246-251）

主 题 词：白血病 髓系 慢性 BCR-ABL阳性 融合蛋白质类 bcr-abl 蛋白酪氨酸激酶类 突变 聚合酶链反应 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.03.012

馆 藏 号：203136516...