人源CD137L基因在不同表达系统中表达效率的比较

作     者：何东洋 马超 高振月 王淑珍 陈依军 He Dongyang;Ma Chao;Gao Zhenyue;Wang Shuzhen;Chen Yijun

作者机构：中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 

基　　金：天然药物活性组分与药效国家重点实验室(中国药科大学)资助项目(JKGQ201105) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2014年第30卷第9期

页      码：178-183页

摘      要：比较分析人源CD137L在毕赤酵母、枯草杆菌及大肠杆菌中的表达差异,建立适合CD137L的表达系统并检测CD137L的生物学活性。设计PCR引物,以酵母表达质粒pPIC9K-CD137L为模板,扩增CD137L片段,分别构建枯草杆菌表达质粒及大肠杆菌表达质粒,再转化至相应的宿主菌并筛选阳性转化子;SDS PAGE电泳分析CD137L的表达情况并比较差异;稀释复性法复性CD137L包涵体,用离子交换层析纯化CD137L;T细胞激活试验检测CD137L的活性。CD137L在3个表达系统中均可以表达并且得到质谱鉴定,但是在毕赤酵母、枯草杆菌中的表达量微弱,而在大肠杆菌中CD137L以包涵体形式高效表达,平均1 L培养液能得到0.8 g包涵体沉淀,200 mg变性蛋白。经复性纯化后得到的CD137L能有效激活T细胞增殖并且其刺激活性呈现浓度依赖效应。与毕赤酵母、枯草杆菌相比,大肠杆菌表达系统能高效表达CD137L蛋白,并且经稀释复性后CD137L保持了刺激小鼠T细胞增殖的活性。

主 题 词：毕赤酵母 枯草杆菌 大肠杆菌 CD137L T细胞增殖 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.09.063

馆 藏 号：203136594...