HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化

作     者：雷迎峰 尹文 杨敬 吕欣 韦三华 安群星 徐志凯 LEI Ying-feng;YIN Wen;YANG Jing;LU Xin;WEI San-hua;AN Qun-xing;XU Zhi-kai

作者机构：第四军医大学:基础部微生物学教研室西安710032 

基　　金：陕西省自然科学基金(2004 C2-45) 国家自然科学基金(30600564)资助 

出 版 物：《科学技术与工程》 (Science Technology and Engineering)

年 卷 期：2008年第8卷第5期

页      码：1151-1155页

摘      要：在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。

主 题 词：丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 大肠杆菌 蛋白表达 

学科分类：0831[工学-公安技术类] 08[工学] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-1815.2008.05.005

馆 藏 号：203137161...