人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定

作     者：王水良 庄岳鹏 王志红 兰风华 WANG Shui-liang;ZHUANG Yue-peng;WANG Zhi-hong;LAN Feng-hua

作者机构：南京军区福州总医院检验医学研究所分子医学研究中心福州350025 

基　　金：福建省青年科技人才创新项目资助(编号:2004J067) 

出 版 物：《肿瘤》 (Tumor)

年 卷 期：2007年第27卷第3期

页      码：190-193页

摘      要：目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencerl．0-U6中以置换其U6启动子;依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRtH-1表达下调,抑制率约达85%;同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE1与Oct 4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应。

主 题 词：肝肿瘤 实验性 甲胎蛋白类 RNA干扰 调控序列 核酸 HepG2细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3781/j.issn.1000-7431.2007.03.007

馆 藏 号：203137803...