猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立

作     者：严杰聪 王帅勇 王曼茱 王娟 荣新利 邢燕茹 虞凌雪 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 童光志 于海 YAN Jiecong;WANG Shuaiyong;WANG Manzhu;WANG Juan;RONG Xinli;XING Yanru;YU Lingxue;ZHOU Yanjun;SHAN Tongling;TONG Wu;ZHENG Hao;LIU Changlong;TONG Guangzhi;YU Hai

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31970175) 国家生猪现代产业技术体系建设项目(NYCYTX-009) 中国农业科学院创新工程“猪病毒性繁殖障碍综合症团队”项目 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2024年第32卷第4期

页      码：79-84页

摘      要：Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。

主 题 词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白 同源重组 表达纯化 ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20220424.007

馆 藏 号：203137838...