菊花SSR-PCR反应体系的建立和优化

作     者：李亚慧 黄丛林 董然 LI Ya-hui;HUANG Cong-lin;DONG Ran

作者机构：吉林农业大学园艺学院吉林长春130118 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097 

基　　金：北京市科委资助项目(Z09050600630906 D101105046210001) 科技部科技支撑计划资助项目(2009BADB8B04) 北京市园林绿化局花卉育种研发资助项目(YLHH201100104) 

出 版 物：《北方园艺》 (Northern Horticulture)

年 卷 期：2012年第13期

页      码：127-131页

摘      要：为快速确定菊花SSR反应体系,利用正交实验设计L16(45)对菊花基因组SSR-PCR反应体系的5个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶)在4个水平上进行正交设计,筛选出适合菊花的最佳SSR-PCR反应体系,进一步利用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平。结果表明:建立菊花基因组DNA SSR-PCR反应体系为25μL:60ng模板DNA、2.0mmol/L Mg2+、0.1mmol/L dNTP、0.3μmol/L引物、1UTaq酶。并对菊花引物进行梯度退火试验,其最佳退火温度在53.1℃;扩增程序是:95℃预变性5min;32个循环的94℃变性50s、53.1℃退火50s、72℃延伸50s;72℃延伸8min,4℃保存。该体系的建立为今后菊花SSR分析奠定了基础。

主 题 词：菊花 SSR标记 正交设计 反应体系优化 

学科分类：090706[090706] 0907[农学-草药学] 09[农学] 

馆 藏 号：203138026...