用改进的重叠延伸PCR技术构建三位点突变载体

作     者：郭紫芬 轩贵平 陈方方 张式一 GUO Zi-Fen;XUAN Gui-Ping;CHEN Fang-Fang;ZHANG Shi-Yi

作者机构：南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001 

基　　金：国家自然科学基金(81102516) 南华大学博士启动基金(2012XQD18) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2014年第25卷第2期

页      码：248-251页

摘      要：目的:改进传统重叠延伸PCR方法,实现引入3个不同DNA突变位点的简便的多位点定点突变。方法:根据前期构建的包含人线粒体12S rRNA(NC 01290)3个热点突变位点的野生型质粒序列,利用Muta Primer 2.0软件设计针对3个热点突变位点的3对互补的定点突变引物,以野生型质粒为模板,结合重叠延伸PCR反应和冷冻析出法,产生同时包含3个突变位点的突变目的片段,酶切后克隆到载体中,测序确证是否突变成功。结果:DNA测序证实3个不同突变位点同时成功引入,定点突变载体构建成功。结论:用改进的重叠延伸PCR技术能简便、高效地获得多位点定点突变载体,在分子生物学领域有较高的使用价值。

主 题 词：重叠延伸PCR 多位点突变 定点突变 冷冻析出 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2014.02.023

馆 藏 号：203138101...