侵袭性马尔尼菲青霉感染实时荧光定量PCR检测技术的初步建立

作     者：鲁莎 席丽艳 胡永轩 

作者机构：中山大学孙逸仙纪念医院皮肤性病科广东广州510120 南方医科大学第三附属医院皮肤科广东广州510630 

基　　金："艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项(编号:2013ZX10004612) 

出 版 物：《皮肤性病诊疗学杂志》 (Journal of Diagnosis and Therapy on Dermato-venereology)

年 卷 期：2014年第21卷第3期

页      码：258-260,263页

摘      要：目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为1.938,最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论:建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。

主 题 词：马尔尼菲青霉病 SYBR Green Ⅰ 实时定量PCR 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-8468.2014.03.031

馆 藏 号：203138132...