基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

作     者：陈千林 王振宝 吉尔格力 刘梦丽 许正茂 巴音查汗 CHEN Qian-lin;WANG Zhen-bao;Jiergeli;LIU Meng-li;XU Zheng-mao;Bayinchahan

作者机构：新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心伊宁835000 巴音郭楞职业技术学院生物工程系库尔勒841000 

基　　金：自治区科技成果转化专项资金项目(201454129) 库尔勒市重点科技计划项目(2013051108) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第43卷第3期

页      码：622-628页

摘      要：本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499F/SN/T3499R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499F/SN/T 3499R的最低检测量相同,为19.9fg/μL,F2/R2最低检测量为199fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499F/SN/T 3499R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9pg/μL和199fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。

主 题 词：新孢子虫 新孢子虫病 牛 PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.009

馆 藏 号：203138194...