人β_2-微球蛋白基因的克隆与原核中的表达

作     者：孙万军 徐东刚 杜建芳 邹民吉 王金凤 蔡欣 王嘉玺 艾辉胜 SUN Wan-Jun;XU Dong-Gang;DU Jian-Fang;ZOU Min-Ji;WANG Jin-Feng;CAI Xin;WANG Jia-Xi;AI Hui-Sheng

作者机构：军事医学科学院附属医院血液科北京100071 军事医学科学院基础医学研究所北京100850 

基　　金：军队"十一五"医药卫生科研基金资助项目 编号06MA316 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2006年第14卷第3期

页      码：521-524页

摘      要：本研究获取主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子的轻链部分,即β2-微球蛋白(β2m)以制备MHCⅠ类分子-肽四聚体。根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人白细胞中克隆β2m的基因,并构建β2m的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。结果显示:构建的编码成熟β2m的pET-β2m可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达β2m,表达量占菌体总蛋白的32%,β2m以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SephacrylS-200HR(S-200)柱层析纯化,纯度可达95%以上,纯化产物采用稀释法复性。Westernblot分析表明,该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性。结论:获得了高效表达人β2m的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的β2m包涵体纯化、复性方法,为制备MHCⅠ类分子-肽四聚体奠定了基础。

主 题 词：β2-微球蛋白 MHCⅠ类分子 基因表达 基因克隆 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-2137.2006.03.023

馆 藏 号：203138813...