新城疫病毒Mukteswar毒株反向遗传系统的建立

作     者：李宝玉 李学瑞 殷相平 李智勇 兰喜 杨彬 张韵 柳纪省 

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 

基　　金：科研院所社会公益专项(2005DIB4J041) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2011年第41卷第10期

页      码：1011-1015页

摘      要：为了建立新城疫病毒(NDV)Mukteswar毒株的反向遗传操作系统,根据已测定的NDV Muk-teswar毒株的全基因组序列设计了5对引物,扩增出包含全基因组cDNA的5条片段,并按一定顺序依次克隆入pSL1180载体中,然后在cDNA 5′末端插入T7启动子序列,3′末端导入具有自我剪切功能的丁肝病毒核酶序列和T7转录终止信号,构建了能转录具有精确5′和3′末端全基因组cDNA的转录载体pNDVT7。将表达核蛋白、磷酸蛋白及转录大蛋白的辅助表达载体pCIneoNP、pCIneoP和pCIneoL与pNDVT7按一定比例混合共转染BRS-T7细胞,4 d后将细胞悬液接种9日龄SPF鸡胚,结果获得了高效价的重组病毒。表明本研究建立的反向遗传系统能高效、快速拯救重组新城疫病毒毒株。

主 题 词：新城疫病毒 Mukteswar毒株 T7启动子 反向遗传操作系统 丁肝病毒核酶(HdvRz) 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2011.10.004

馆 藏 号：203138850...