GST-gAD在大肠杆菌中的优化表达及其生物活性测定

作     者：王静 肖彬 尹东 罗志军 WANG Jing;XIAO Bing;YIN Dong;LUO Zhi-jun

作者机构：南昌大学研究生院医学部 南昌大学第二附属医院分子医学重点实验室南昌330006 美国波士顿大学医学院糖尿病研究中心美国波士顿02138 

出 版 物：《江西医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Jiangxi)

年 卷 期：2008年第48卷第3期

页      码：12-15页

摘      要：目的探讨可溶性重组脂联素球状结构域融合蛋白(GST-gAD)在大肠杆菌中的优化表达及其抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的生物学活性。方法用含有GST-gAD基因的原核表达载体pGEX-KG-gAD转化*** J M109,同理空载质粒pGEX-KG作为内对照同时转化*** J M109;将影响融合蛋白表达的4个因素,温度、IPTG浓度、细菌密度OD600和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件,用亲和层析法纯化GST-gAD;用MTT法检测GST-gAD对MDA-MB-231增殖的影响。结果GST-gAD最佳表达条件为温度32℃,IPTG的浓度1.0mmol/L,诱导前细菌密度OD6001.0,诱导表达时间1.5h。GST-gAD浓度高于0.5μmol/L时对MDA-MB-231细胞的生长具有明显的抑制作用。结论通过正交设计确定了可溶性GST-gAD融合蛋白在大肠杆菌中表达的优化条件并且当重组融合蛋白在大于0.5μmol/L时对MDA-MB-231细胞的生长具有明显的抑制作用。

主 题 词：脂联素 球状结构域 重组蛋白表达 乳腺癌细胞 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2294.2008.03.004

馆 藏 号：203139374...