抗人RBC血型B抗原双价小分子抗体基因的构建与表达

作     者：王长军 唐家琪 李先富 潘秀珍 操敏 

作者机构：南京军区军事医学研究所流行病室南京210002 

基　　金：军队医药卫生科研基金!资助项目 No-96 M025 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：1999年第15卷第4期

页      码：249-252页

摘      要：目的： 分离抗人红细胞血型Ｂ抗原单克隆抗体（ｍＡｂ） ５Ｄ１２ 可变区基因， 构建并表达其双价小分子抗体（ｄｉａｂｏｄｙ） 融合蛋白， 为用原核细胞生产抗血型Ｂ抗原工程抗体进行基础研究。方法： 设计合成抗体重、轻链可变区引物， 通过加端ＰＣＲ技术， 在ｍＡｂ ５Ｄ１２ ＶＨ 和ＶＬ基因两端引入连结短肽和适当的限制性酶切位点，体外连接构建５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 基因， 并将其克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ２ 中， 在Ｅ－ｃｏｌｉ ＴＧ１ 中表达。运用ＰＣＲ和双脱氧核苷酸链末端终止法分析其核苷酸序列。结果： ＤＮＡ 序列分析表明， ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 基因全长为６９９ｂｐ；其中ＶＨ 长３５１ｂｐ ， 编码１１７ 个氨基酸； ＶＬ 长３２４ｂｐ ， 编码１０８ 个氨基酸， 两者以五肽连接头相连； 重组体表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ显示， ＧＳＴ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 表达产物的相对分子质量（ Ｍｒ） 为５１ ０００ 左右， 与预期结果相符。光密度扫描结果表明， ＧＳＴ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 融合蛋白占菌体总蛋白的２４－６％ ， 表达产物主要以不溶性的包涵体形式存在。结论： 成功地构建并表达了５Ｄ１２ 双价小分子抗体基因，

主 题 词：ABO血型抗原 基因工程抗体 大肠杆菌 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.002339

馆 藏 号：203139483...