弓形虫抗原基因真核表达质粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4的构建

作     者：杜海娟 卢作超 刘晓泉 吕国丽 燕慧 田春林 DU Hai-juan;LU Zuo-chao;LIU Xiao-quan;LV Guo-li;YAN Hui;TIAN Chun-lin

作者机构：广西医科大学寄生虫学教研室广西南宁530021 

基　　金：广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻10124001A-64) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2014年第9卷第3期

页      码：258-260,263页

摘      要：目的构建弓形虫抗原基因真核表达质粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4。方法根据弓形虫RH标准株SAG1和SAG4基因序列分别设计一对特异引物(分别含有HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ内切酶位点),PCR扩增目的基因,并将这两段基因分别克隆至PEGM-T Easy载体,经菌落PCR和双酶切鉴定;用HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ分别双酶切PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4和pVAX1,得到含内切酶位点的SAG1和SAG4基因片段,分别与pVAX1连接,构建pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4真核表达质粒,经菌落PCR和双酶切鉴定。结果PCR扩增得到目的基因SAG1和SAG4,测序结果分别与弓形虫RH标准株SAG1和SAG4基因比较,符合率均为100%。构建PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4克隆质粒和pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表达质粒,分别经菌落PCR和双酶切鉴定,显示722bp的SAG1基因片段和511bp的SAG4基因片段均插入载体PEGM-T Easy和pVAX1中。结论成功克隆了pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表达质粒,为弓形虫基因疫苗应用研究奠定了基础。

主 题 词：弓形虫 基因疫苗 真核表达质粒 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.140316

馆 藏 号：203139637...