利用锁核酸化学偶联FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的体外实验

作     者：马丽 陈红岩 朱化星 李威 卢大儒 Li Ma;Hongyan Chen;Huaxing Zhu;Wei Li;Daru Lu

作者机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 上海近岸科技有限公司上海201203 生工生物工程(上海)股份有限公司上海201611 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2016年第38卷第4期

页      码：350-359页

摘      要：乙肝病毒（HBV）是有缺口的双链DNA病毒,侵入人体肝细胞后形成共价闭合环状DNA（ccc DNA）持续复制,并在逆转录过程中随机整合入宿主基因组。慢性乙型肝炎感染者平均每个细胞中含有33个ccc DNA拷贝,半衰期长达35~57 d,很难从体内彻底清除。利用锁核酸抑制HBV转录,是乙肝治疗的新策略。此外,利用基因组编辑技术靶向切割HBV基因组,有望从源头治愈乙型肝炎。基于锁核酸与双链DNA形成三股螺旋的能力、抵御核酸酶及聚合酶的稳定性以及对单碱基错配的敏感性,本研究以靶向切割乙型肝炎病毒为例,设计构建锁核酸修饰的寡核苷酸作为DNA结合域,有效增强对靶基因的特异性识别;同时利用FokⅠ核酸酶分子量小、二聚化时才具有酶活等特点,设计构建FokⅠ切割域二聚体重组蛋白作为DNA切割域;进而通过双功能交联剂GMBS,建立了5′端氨基（-NH2）修饰的锁核酸与N端巯基（-SH）修饰的FokⅠ核酸酶定向化学偶联的方法,并在体外验证了新型工具对HBV基因的靶向切割。该方法为此后在体内进行高特异性、无整合风险的抗病毒基因治疗提供了全新的技术思路。

主 题 词：乙肝病毒 基因编辑 锁核酸 FokⅠ 化学偶联 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16288/j.yczz.15-435

馆 藏 号：203139730...