NY-ESO-1/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定

作     者：汤蕾 宋朝君 孙元杰 李娜 魏玉英 孙奕 杨琨 TANG Lei;SONG Chao-jun;SUN Yuan-jie;LI Na;WEI Yu-ying;SUN Yi;YANG Kun

作者机构：第四军医大学基础医学院免疫学系陕西西安710032 武警后勤学院病原生物学与免疫学教研室天津300162 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81171977 30872371) 国家高技术研究发展计划(863)重大项目(2006AA02A237) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2012年第28卷第10期

页      码：1094-1097页

摘      要：目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经上下游引物所引入的EcoR I和Xho I双酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定。结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44 000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90%,Western blot结果证实该NY-ESO-1/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,提示为融合蛋白。结论:成功构建了NY-ESO-1基因原核表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式NY-ESO-1/GST融合蛋白。

主 题 词：NY.ESO-1 GST 融合蛋白 原核表达 纯化 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.006584

馆 藏 号：203140320...