香港巨牡蛎ISSR-PCR反应体系的建立及优化

作     者：黎小正 童桂香 韦信贤 吴祥庆 陈康 

作者机构：广西渔业病害防治环境监测和质量检验中心广西南宁530021 钦州市钦南区水产畜牧局广西钦州535000 

基　　金：广西科技攻关项目(0992015-1) 

出 版 物：《海洋科学》 (Marine Sciences)

年 卷 期：2011年第35卷第8期

页      码：18-24页

摘      要：以香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)基因组DNA为模板,采用正交设计及单因素比较试验,分别对Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶和DNA模板浓度的PCR原料进行优化,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。确立了香港巨牡蛎的最适ISSR-PCR反应体系:25μL反应体系中含PCR 1×Buffer,2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、0.2μmol/L引物、1.2 U Taq DNA聚合酶、20 ng DNA模板。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,48～54℃(随引物而确定)退火1 min,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃延伸10 min。利用所建立的ISSR-PCR反应体系对香港巨牡蛎基因组DNA进行扩增,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带,为进一步利用ISSR分子标记研究香港巨牡蛎的遗传多样性奠定了基础。

主 题 词：香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis) ISSR—PCR 体系优化 

学科分类：090801[090801] 0908[0908] 09[农学] 

核心收录：

馆 藏 号：203140743...