PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及在SW480细胞中的表达

作     者：柳玉红 李建明 周军 丁彦青 LIU Yu-hong;LI Jian-ming;ZHOU Jun;DING Yan-qing

作者机构：南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室广东广州510515 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30500241、30670968和30700286)~~ 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2008年第28卷第4期

页      码：509-512页

摘      要：目的构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系,为PRL-3基因功能研究奠定基础。方法设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体。通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系。结果成功构建PRL-3pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L。RT-PCR、Western blotting结果表明,克隆1PRL-3 mRNA及蛋白显著降低。结论成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系。

主 题 词：RNA干扰 慢病毒 PRL-3 结直肠癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-4254.2008.04.001

馆 藏 号：203140899...