玉米矮花叶病毒CP基因dsRNA的原核表达与分离

作     者：甘德芳 张姣 赵阳 朱苏文 程备久 GAN De-fang;ZHANG Jiao;ZHAO Yang;ZHU Su-wen;CHENG Bei-jiu

作者机构：安徽农业大学园艺学院安徽合肥230036 安徽农业大学 生命科学学院安徽合肥230036 

基　　金：安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(KJ2 011A110) 

出 版 物：《激光生物学报》 (Acta Laser Biology Sinica)

年 卷 期：2011年第20卷第3期

页      码：360-366页

摘      要：根据玉米矮花叶病毒CP基因序列设计特异性引物,RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒CP基因特异性干涉片段,将干涉片段及pUCCRNAi载体分别用BamH I及Sal I双酶切,然后将干涉片段分别正反向插入pUC-CRNAi载体中,构建CP基因反向重复克隆载体pUCCRNAi+2 F。再利用PstⅠ-Sal I位点插入到L4440质粒中构建原核表达载体LMCP。利用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行优化。结果表明,经过IPTG诱导,LMCP在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase I和RNase A消化处理,证实为dsRNA。同时IPTG浓度为0.4～0.6mmol/L,诱导表达4h,dsRNA的表达量最高。另外,溶解于ddH_2O中的dsRNA稳定性要高于溶解在NaCl中的,且随着放置时间的延长,dsRNA将出现明显的降解。

主 题 词：玉米矮花叶病毒(Maize Dwarf Mosaic Virus MDMV) CP基因 原核表达 dsRNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-7146.2011.03.016

馆 藏 号：203141034...