稳定表达人SidT2基因细胞系的建立及其dsRNA转运功能的研究

作     者：任瑞文 张新军 唐博恒 张培 洪文艳 刘建伟 REN Rui-Wen;ZHANG Xin-Jun;TANG Bo-Heng;ZHANG Pei;HONG Wen-Yan;LIU Jian-Wei

作者机构：广州军区疾病预防控制中心广东广州510507 珠海市第二人民医院广东珠海519020 

基　　金：广东省科技计划(2010B031600125 2011B031500011) 广州市科技计划(2010Y1-C151) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2013年第24卷第4期

页      码：493-496页

摘      要：目的:构建稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,探讨SidT2基因过表达与细胞转运双链RNA(dsRNA)能力的关系。方法:根据人SidT2基因序列设计引物,克隆其编码区序列,经双酶切后与pEGFP-N3载体连接,构建其真核表达载体,分别瞬时转染BHK及MDCK细胞,并使用G418筛选稳定表达细胞系;在此基础上,体外转录合成绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA,以GFP基因为报告基因,进一步分析过表达人SidT2基因对BHK及MDCK细胞转运dsRNA能力的影响。结果:经基因克隆、酶切、连接后,构建了人SidT2基因真核表达载体pEGFP-SidT2;经瞬时转染及G418筛选,获得稳定过表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,实时荧光定量RT-PCR分析表明,其SidT2基因转录水平分别提高71、64.5倍;稳定表达SidT2基因后,在培养液中添加GFP dsRNA,GFP荧光强度较对照细胞分别降低88.1%、73.7%,表明稳定表达SidT2基因的BHK、MDCK细胞转运dsRNA的能力显著增强。结论:构建了稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,SidT2基因过表达可显著提高外源性dsRNA的转运能力。

主 题 词：SidT2基因 真核表达 BHK细胞系 MDCK细胞系 细胞转运 双链RNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071009[071009] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2013.04.011

馆 藏 号：203141138...