肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制

作     者：李芳 邹冬玲 曹姝 李少林 

作者机构：重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016 重庆市肿瘤医院妇产肿瘤科重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81171365) 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2013年第38卷第12期

页      码：1419-1424页

摘      要：目的:构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA(shRNA),通过下调HepG-2肝癌细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞。②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的CD133干扰片段,重组载体***-shRNA972,***2377,***-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆。③***-shRNA972,***-shRNA2377,***485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立***-shRNA972,***-shRNA2377,***-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组。感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果:①成功构建了Survivin启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性。②成功包装***972,***-shRNA2377,***-shRNA485腺病毒。③RT-PCR和Western blot检别显示***-shRNA972、***2377,有封闭CD133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)%、(56.98±0.03)%;***-shRNA972、***-shRNA2377、***-shRNA485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.40)%、(48.65±0.20)%、(34.67±0.40)%;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,***-shRNA972组生长抑制率为(72.88±0.74)%,***-shRNA2377组生长抑制率为(59.90±0.87)%,***-shRNA485组生长抑制率为(30.18±0.95)%。结论:肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显著下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。

主 题 词：Survivin CD133 小发夹RNA 肝癌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.11699/cyxb20131206

馆 藏 号：203141157...