hHGF-αcDNA的克隆及表达载体的构建

作     者：党素英 程牛亮 牛勃 王惠珍 赵建滨 张祖珣 DANG Su ying, CHENG Niu liang, NIU Bo, et al (Dept of Biochemistry and M olecular Biology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

作者机构：山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 首都医科大学生物化学教研室 

基　　金：山西省归国留学人员科研基金资助项目 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2001年第32卷第2期

页      码：100-103页

摘      要：目的　定点突变法扩增制备完整hHGF αcDNA ,克隆并构建其原核表达载体。方法与结果　以含有人HGFcDNA全序列的质粒 pRC/CMV hHGF为模板 ,设计合成一对特异引物进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩增hHGF αcDNA基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测 ,结果显示扩增得到了 1 34kb长的目的基因产物。将扩增产物以限制性内切酶XhoⅠ酶将其切为 386bp、95 4bp两个片段 ,分别以EcoRⅠ /XhoⅠ、XhoⅠ /BamHⅠ与 pBSKS载体连接重组 ,对目的基因分段克隆后进行序列测定 ,结果表明除通过定点突变引入的起始密码ATG、终止密码子TAA、TGA及EcoRⅠ、BamHⅠ识别位点外 ,扩增得到的PCR产物序列与Nakamura等报道的HGFcDNA中不包括前体序列的α链部分完全相同。将以EcoRⅠ /XhoⅠ、XhoⅠ /BamHⅠ从pBSKS HGF α 386、pBSKS HGF α 95 4中切出的 386bp、95 4bp两个片段以EcoRⅠ /BamHⅠ与pBV2 2 0连接构建重组表达质粒 pBV2 2 0 HGF α ,限制性内切酶图谱分析显示HGF αcDNA插入到载体pBV2 2 0的EcoRⅠ /BamHⅠ位点 ,插入方向正确。温度诱导表达 ,SDS PAGE显示一分子量与单体hHGF α链吻合的蛋白带 ,证明表达质粒构建成功。结论　设计制备了hHGF α链cDNA ,克隆建立了hHGF α链原核表达质粒。

主 题 词：肝细胞生长因子 克隆 cDNA 基因表达 载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-6611.2001.02.002

馆 藏 号：203141180...