人双埃克病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：余莹 朱彩霞 杨志彪 袁聪俐 华修国 YU Ying;ZHU Cai-xia;YANG Zhi-biao;YUAN Cong-li;HUA Xiu-guo

作者机构：上海交通大学农业与生物学院上海200240 

出 版 物：《上海交通大学学报（农业科学版）》 (Journal of Shanghai Jiaotong University(Agricultural Science))

年 卷 期：2012年第30卷第1期

页      码：1-7页

摘      要：为建立一种能快速、简便、灵敏地检测人双埃克病毒(Human Parechovirus,HPeV)SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank发表的人双埃克病毒8个基因型的参考毒株全序列,针对5′端非编码区保守序列设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增此靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,经过优化反应条件,建立标准曲线和融解曲线,对其灵敏性、特异性和重复性进行评价;检测临床粪便样品共156份,并与常规套式RT-PCR检测结果进行比较。结果显示,建立的标准曲线Ct值与模板浓度呈现良好的线性关系(r2=0.999),融解曲线特异,检测灵敏度可达60拷贝/μL,比常规PCR检测方法高100倍,重复性变异系数小(<1%),能特异地检测HPeV。临床样本检测结果也表明该法(检出30份)灵敏度高于套式RT-PCR(检出21份)。实验结果证明建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,有望成为HPeVs的分子诊断、流行病学调查等相关研究的工具。

主 题 词：人双埃克病毒 SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.3969/J.ISSN.1671-9964.2012.01.001

馆 藏 号：203141675...