Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达

作     者：王超 付玉志 张伟伟 陈宗艳 李传峰 杨宗伟 吴润 刘光清 

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 湖南农业大学动物科技学院长沙410128 浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 

基　　金：公益性农业科研专项(201003012) "863"计划(2011AA10A200) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2010JB18) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2011年第19卷第2期

页      码：20-25页

摘      要：根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌*** BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。

主 题 词：Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ) RNA聚合酶基因(RdRp) 原核表达 序列分析 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2011.02.005

馆 藏 号：203141932...