人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定(英文)

作     者：徐聪 李国伟 刘泽玉 廖嘉伟 薛攀攀 谭炳炎 陆家海 XU Cong;LI Guo-wei;LIU Ze-yu;LIAO Jia-wei;XUE Pan-pan;TAN Bin-yan;LU Jia-hai

作者机构：中山大学公共卫生学院广州510080 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2007年第7卷第5期

页      码：401-407页

摘      要：目的研究含人连接蛋白Connexin26(Cx26)基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA,经逆转录制备成cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。

主 题 词：遗传性耳聋 Connexin26 真核表达载体 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100213[100213] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-3619.2007.05.001

馆 藏 号：203142407...