利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达

作     者：王庆华 高丽丽 梁会超 杜国华 巩婷 杨金玲 朱平 WANG Qing-hua;GAO Li-li;LIANG Hui-chao;DU Guo-hua;GONG Ting;YANG Jin-ling;ZHU Ping

作者机构：中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室卫生部天然药物生物合成重点实验室北京100050 

基　　金：北京市自然科学基金资助项目(7122115) 天然药物活性物质与功能国家重点实验室自主课题 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2015年第50卷第1期

页      码：118-122页

摘      要：羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)序列设计引物,扩增5 长片段(包括erg7基因5 非编码区启动子序列和部分编码区序列)、5 短片段(包括erg7基因5 非编码区部分启动子序列和部分编码区序列)和erg7基因编码区片段,分别将其反向克隆到表达载体p ESC-URA上,构建反义表达质粒。用反义表达质粒转化酿酒酵母INVSc1,在营养缺陷型培养基SD-URA上筛选重组菌株。通过半定量PCR进行检测,结果表明:与INVSc1相比,转入erg7基因编码区反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显著变化,而转入5 长反义片段和5 短反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与INVSc1相比,转入5 短反义片段和erg7基因编码区反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量没有显著变化,而转入5 长反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA技术抑制酿酒酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达,为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物代谢途径奠定了基础。

主 题 词：酿酒酵母 erg7基因 反义RNA 麦角甾醇 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100703[100703] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16438/j.0513-4870.2015.01.019

馆 藏 号：203142517...