牙本质基质蛋白1功能片段的融合表达及其胞内定位

作     者：王学政 张更林 崔亚洲 刘建民 柴政斌 韩金祥 

作者机构：山东省医药生物技术研究中心国家卫生部医药生物技术重点实验室山东省罕见病重点实验室山东省医学科学院 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250062 辽宁医学院附属第一医院检验科辽宁锦州121001 

基　　金：国家科技支撑计划(2013BAI07B02)资助 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2013年第26卷第4期

页      码：491-494页

摘      要：目的构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位。方法利用定点突变改造DMP1基因,获得DMP1基因的SNP rs10019009的不同基因型,将含SNP位点不同碱基的37 kD N-DMP1和全长DMP1基因定向克隆入含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP中,构建重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP,通过脂质体法瞬时转染HEK293细胞,荧光显微镜观察重组融合蛋白DMP1-EGFP的表达及胞内定位。结果 DNA测序结果表明,定点突变后的DMP1基因的碱基序列与设计序列完全一致;PCR和DNA测序显示重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP构建正确;融合蛋白DMP1-EGFP在HEK293细胞中主要表达于细胞胞浆中。结论成功构建了含rs10019009-SNP位点不同碱基的37 kD的N-DMP1和全长DMP1基因重组表达质粒,并在HEK293细胞的胞浆中有效表达,为进一步研究DMP1基因的功能奠定了基础。

主 题 词：牙本质基质蛋白1 绿色荧光蛋白 融合表达 胞内定位 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cjb.2013.04.56.wangxzh.033

馆 藏 号：203142660...